實(shí)驗(yàn)干貨 | 常用分子生物學(xué)技術(shù)原理

1. 分子雜交與印跡技術(shù)

（1）探針是經(jīng)過特殊標(biāo)記，能與待測(cè)單鏈核酸分子互補(bǔ)結(jié)合的已知核酸片段

（2）印跡是將電泳分離后的大分子轉(zhuǎn)印到硝酸纖維素膜上，以便雜交的技術(shù)

（3）DNA印跡：Southern blotting，用于檢測(cè)基因組DNA

（4）RNA印跡：Northern blotting，主要用來(lái)檢測(cè)mRNA的表達(dá)水平

（5）蛋白質(zhì)印跡：Western blotting，用于檢測(cè)蛋白質(zhì)的水平

2. PCR技術(shù)

（1）反應(yīng)體系：?jiǎn)捂淒NA模板、特異性DNA引物、耐熱DNA聚合酶（Taq DNA聚合酶）、dNTPs底物、含Mg2+的緩沖液。

（2）反應(yīng)步驟：變性、復(fù)性、延伸

（3）逆轉(zhuǎn)錄PCR：即RT-PCR，在PCR之前先將單鏈mRNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。這是目前從RNA水平出發(fā)研究基因表達(dá)或獲得目的基因最有效的方法。

（4）應(yīng)用：目的基因的克隆、基因的體外突變、微量DNA或RNA擴(kuò)增、DNA序列測(cè)定、基因突變分析

3. 蛋白質(zhì)相互作用研究

酵母雙雜交技術(shù)、CoIP

4. DNA-蛋白質(zhì)相互作用

電泳遷移率變動(dòng)分析（EMSA）、染色質(zhì)免疫沉淀技術(shù)（ChIP）

5. 基因敲除

即gene knock-out，通過同源基因重組原理使得某個(gè)基因活性喪失，從而研究該基因功能的方法

來(lái)源：生化一點(diǎn)通