protocol 分享｜瘤細(xì)胞皮下移植侵襲模型構(gòu)建

用途

常用于研究腫瘤細(xì)胞的成瘤能力、腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移、腫瘤細(xì)胞的耐藥和靶分子對(duì)腫瘤細(xì)胞的發(fā)生發(fā)展的影響等等。

材料與儀器

1、動(dòng)物選購(gòu)：一般選擇 6 周齡左右，體重為 18~22 g 的裸鼠，檢疫通過后，飼養(yǎng)于隔離屏障環(huán)境。

2、腫瘤細(xì)胞準(zhǔn)備：注意計(jì)算好細(xì)胞用量，細(xì)胞量一般為 5 × 106 個(gè)/200 μl（不同細(xì)胞系的接種量可能不同）。

3、耗材準(zhǔn)備：PBS×1、75% 酒精×1、濾紙×3 張、手套、器械盒（主要有彎剪、鑷子、1 ml 注射器和止血夾）、棉球等。

步驟

1、腫瘤細(xì)胞擴(kuò)增：

（a）取腫瘤細(xì)胞復(fù)蘇并擴(kuò)增，用 0.25% 胰酶消化，1 000 rpm 離心。

（b）去除上清，加入 1×PBS 將細(xì)胞洗一遍，再加入 1×PBS 重懸，計(jì)數(shù)，按比例稀釋細(xì)胞懸液，調(diào)整為約 5 × 106 個(gè)/200 μl 的細(xì)胞懸液。

（c）用無血清的培養(yǎng)基吹勻離心兩遍，再用無血清的培基重懸混勻，置于 0.5 ml 的 EP 管中，冰上備用（考慮到細(xì)胞活性，應(yīng)盡快注射到裸鼠皮下）。

2、成瘤過程：

（a）根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求分組，每組小鼠至少 5 只以上。

（b）抓取時(shí)用大拇指和食指抓住裸鼠的整個(gè)背部和頭部，無名指和小指壓住小腿和尾巴。棉球蘸取酒精后擦拭注射部位（背部或腋下）。用 1 ml 注射器（選擇常規(guī) 1 ml 注射器即可）吸取 200 μl 細(xì)胞懸液，注射至裸鼠表皮下。

3、成瘤后：

（a）注射瘤細(xì)胞后通常在 3 天后肉眼觀察，并在每次觀察時(shí)都記錄裸鼠的體重。

（b）成瘤之后需要定時(shí)用標(biāo)尺記錄腫瘤的長(zhǎng)軸和短軸變化，并記錄統(tǒng)計(jì)。

（c）根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求，達(dá)到時(shí)間后頸椎脫臼處死裸鼠，取出腫瘤，拍照記錄。拍照時(shí)注意光線，對(duì)焦清楚。

（d）計(jì)算腫瘤體積公式為：長(zhǎng)軸×寬軸 2/2。

注意事項(xiàng)

（a）細(xì)胞在大量擴(kuò)增時(shí)為了保證細(xì)胞的活性，可以適當(dāng)增加血清和抗生素濃度。

（b）皮下注射成功的標(biāo)準(zhǔn)：皮下注射形成可以推動(dòng)的明顯突起（參考水痘）。

（c）皮下注射瘤細(xì)胞懸液后停留幾秒再拔出針頭，以防止懸液隨針頭滲漏。

（d）注射成瘤后的小鼠容易死亡，注意實(shí)驗(yàn)周期。

（e）可以先進(jìn)行各 3 只分組的預(yù)實(shí)驗(yàn)，如果在裸鼠中實(shí)在無法成瘤，可以選擇其他免疫缺陷型，如 NOG、SCID 等小鼠。

（f）裸鼠成瘤由于存在個(gè)體差異，可能無法成瘤，所以在分組時(shí)盡量多，或成瘤后再進(jìn)行隨機(jī)分組。

（g）提高細(xì)胞的濃度能夠提高成瘤速度，但這個(gè)范圍并不固定，難以把握。