免疫沉淀概述

      科研中我們涉及到的免疫沉淀實(shí)驗(yàn)通常指：免疫共沉淀（Co-IP）、RIP、Chip等等，下面將幾種實(shí)驗(yàn)簡(jiǎn)單概述一下。

      免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation，CoIP）是研究蛋白-蛋白間相互作用的經(jīng)典方法，屬于免疫沉淀技術(shù)的一類，常被用于鑒定特定蛋白復(fù)合物的中未知蛋白組分。免疫共沉淀的設(shè)計(jì)理念是，假設(shè)一種已知蛋白是某個(gè)大的蛋白復(fù)合物的組成成員，那么利用這種蛋白的特異性抗體，就可能將整個(gè)蛋白復(fù)合物從溶液中“拉”下來(lái)（常說(shuō)的“pull-down”），進(jìn)而可以用于鑒定這個(gè)蛋白復(fù)合物中的其他未知成員。

      一般大致步驟為：抗體與細(xì)胞裂解液或蛋白表達(dá)上清中相應(yīng)的蛋白結(jié)合后，再與蛋白A/G（ProteinA/G）（或二抗）偶聯(lián)的瓊脂糖微珠（ProteinA/G Magnetic beads）孵育，通過(guò)離心得到微珠-蛋白A/G（或二抗）-抗體-目的蛋白復(fù)合物。復(fù)合物沉淀經(jīng)離心洗滌后，重懸于電泳上樣緩沖液，沸水浴5-10 min，在高溫及還原劑的作用下，抗原與抗體解離，離心收集上清，上清中包括抗體（輕鏈和重鏈已斷開(kāi)）和靶標(biāo)蛋白。該上清混合物經(jīng)SDS-PAGE電泳分離和Western blotting顯影，其后依據(jù)顯影后的膠片上是否有目的蛋白條帶，來(lái)判斷免疫沉淀實(shí)驗(yàn)是否成功。