膠原酶 I

膠原酶 I

產(chǎn)品規(guī)格：100mg

儲(chǔ)存方式：4℃避光保存，2年有效。儲(chǔ)存液-20℃避光凍存。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介
     膠原酶(collagenase)是從溶組織梭狀細(xì)胞芽孢桿菌提取制備的，主要水解結(jié)締組織中膠原蛋白成分。當(dāng)擬消化的組織較硬，內(nèi)含較多結(jié)締組織或膠原成分時(shí)，用胰蛋白酶解離細(xì)胞的效果較差，這時(shí)可采用膠原酶解離細(xì)胞法。 膠原酶僅對(duì)細(xì)胞間質(zhì)有消化作用而對(duì)上皮細(xì)胞影響不大。因此適于消化分離纖維性組織、上皮及癌組織，可使上皮細(xì)胞與膠原成分分離而不受損害。常用劑量為最終濃度200U/ml(約為1mg/mL)或0.03%~0.3%。膠原酶分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型以及肝細(xì)胞專用膠原酶，要根據(jù)所要分離消化的組織類型選擇膠原酶類型。
1、膠原酶I（Type I Collagenase）：含有比較均勻的各種酶活力（包括膠原酶、酪蛋白酶、梭菌蛋白酶、胰蛋白酶活性）。通常用作上皮細(xì)胞、肝、肺、脂肪和腎上腺組織細(xì)胞的制備。用于消化組織中連接部分使其成為單個(gè)細(xì)胞，用于哺乳動(dòng)細(xì)胞的分離。
2、膠原酶II（Type II Collagenase）：含有更高的梭菌蛋白酶活性，通常用于心臟、骨、肌肉、胸腺和軟骨等組織來源細(xì)胞的制備；
3、膠原酶III（Type III Collagenase）：含有較低的蛋白酶活性，常用于乳腺細(xì)胞的制備；
4、膠原酶IV（Type IV Collagenase）：膠原酶Ⅳ包含至少7種蛋白酶成分，分子量從68-130KD不等。含有低胰酶活性，通常用于胰島細(xì)胞的制備，或者需要維持受體完整性的細(xì)胞制備實(shí)驗(yàn)。
5、膠原酶V（Type V Collagenase）：膠原酶Ⅴ包含至少7種蛋白酶成分，分子量從68-130KD不等。它可用于胰腺小島組織的分離，將結(jié)締組織分離成單個(gè)細(xì)胞。

使用方法 
1）膠原酶儲(chǔ)存液的配制
     向每管100mg的膠原酶中加入100μL的含Ca²⁺、Mg²⁺的HBSS（Hank’s平衡鹽溶液，含Ca²⁺、Mg²⁺），輕輕旋渦震蕩使其充分溶解，制備成1g/ml（即1000×）的儲(chǔ)存液。然后用低蛋白結(jié)合性的0.22μm的濾膜過濾除菌，分裝成小份量，然后于-20℃避光凍存。
使用前于冰上解凍，避免反復(fù)凍融。其用于組織和細(xì)胞分散的常用濃度為：0.5-2.5mg/ml，用于軟骨消化的常用濃度為1-2mg/ml，需要根據(jù)特定的實(shí)驗(yàn)條件或者參考相應(yīng)的文獻(xiàn)資料確定所需的最佳工作濃度。

2）組織的分離
1）使用無菌手術(shù)刀或剪刀將組織切成3-4mm大小的組織塊；
2）利用含Ca²⁺、Mg²⁺的HBSS洗滌組織塊數(shù)次；
3）加入足量的含Ca²⁺、Mg²⁺的HBSS，使其浸沒組織塊，并加入膠原酶至需要工作濃度；
4）于37℃孵育4-18h。消化時(shí)使用水平搖床以及用3mM的CaCl₂補(bǔ)充消化可以提高消化效率。
5） 已分散開的細(xì)胞可使用不銹鋼或尼龍網(wǎng)篩篩得，收集備用。未完全解離的組織另外添加適量的新鮮膠原酶工作液于37℃繼續(xù)孵育；
6）利用不含膠原酶的HBSS洗滌收集的細(xì)胞數(shù)次；
7）細(xì)胞培養(yǎng)液重懸上述細(xì)胞，利用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)器或其他方法計(jì)算活細(xì)胞密度。
8）于細(xì)胞培養(yǎng)皿上利用合適細(xì)胞培養(yǎng)基接種細(xì)胞。

3） 器官灌注
1）向37℃預(yù)熱的含Ca²⁺、Mg²⁺的HBSS中加入膠原酶，另添加3mM的CaCl₂有助于提高分離效率；
2）按照已優(yōu)化的速率對(duì)相應(yīng)的器官灌注膠原酶工作液；
3）將上述過程中回收的灌注液流經(jīng)不銹鋼或尼龍網(wǎng)篩，從而將已解離的細(xì)胞或小片段組織塊與較大團(tuán)塊分離開來，未充分解離的組織需利用新鮮膠原酶工作液于37℃進(jìn)一步孵育；
4）利用不含膠原酶的HBSS洗滌收集的細(xì)胞數(shù)次；
5）細(xì)胞培養(yǎng)液重懸上述細(xì)胞，利用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)器或其他方法計(jì)算活細(xì)胞密度。
6）于細(xì)胞培養(yǎng)皿上利用合適細(xì)胞培養(yǎng)基接種細(xì)胞。

使用注意事項(xiàng) 
1. 使用本試劑前請(qǐng)仔細(xì)閱讀說明書并規(guī)范無菌操作過程。
2. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套進(jìn)行操作。
3. 該產(chǎn)品僅用作科研檢測(cè)，不能用于臨床應(yīng)用及相關(guān)操作。